Анализ на антиспермальные тела
АСАТ, ТЕСТЫ НА СОВМЕСТИМОСТЬ
АСАТ – анализ на антиспермальные тела (кровь). Анализ сдается без какой-либо предварительной подготовки, с утра натощак. Подробная статья о методах диагностики АСАТ читайте
на http://www.cironline.ru/articles/infertility/36/
Шеечный фактор бесплодия и посткоитальный тест. В организме женщины сперматозоиду предстоит долгий путь до встречи с яйцеклеткой. Это — канал шей-ки матки, полость матки и маточных труб. И на каждом этапе хорошему сперматозоиду предстоят испытания, которые являются важными звеньями естественного отбора. К сожалению, оценить влияние слизистой матки и трубной жидкости на сперматозоиды, невозможно. Но достаточно легко оценить взаимодействие сперматозоидов и слизи шейки матки. Подробнее читайте на
http://www.ma-ma.ru/themes.php/s25/p2/592/m4m5&text
ПРОБА ШУВАРСКОГО
Проба Шуварского — это тест на иммунологическую совместимость. Несовместимость – это состояние, когда в организме женщины вырабатываются антитела (специфические белки) против сперматозоидов мужа, которые подавляют подвижность сперматозоидов и способность их к оплодотворению яйцеклетки.
Проба Шуварского заключается в том, что для исследования берется слизь канала шейки матки у женщины в середине цикла, и проба спермы мужчины после 5-6-дневного воздержания. Слизь и сперма помещаются на предметное стекло. Далее эти капли соединяют и под микроскопом следят: не происходит ли гибель сперматозоидов от "локальных" антител цервикальной слизи. Проба длится 2 часа.
Если в течение этого времени 50% сперматозоидов проникли в каплю слизи, то результат отрицательный, т.е. антител к сперматозоидам нет. Если же половина сперматозоидов гибнет, а остальные теряют подвижность, то тест положительный.
Подробно про антиспермальные антитела
Если дата проведения теста была рассчитана неправильно, то результат теста может быть неудовлетворительным, т.к. до овуляции и после нее шеечная слизь блокирует активность сперматозоидов. Поэтому зачастую необходимо провести несколько таких тестов, причем отслеживаться время наступления овуляции по результатам УЗИ. Многие препараты искажают результаты проб на совместимость. Поэтому желательно избегать приема гормональных и других средств в том цикле, когда предполагается проведение проб на совместимость. Поскольку в большинстве проб изучается реакция слизи, получаемой из шейки матки, со сперматозоида-ми, то в случае отрицательного результата, т.е. когда слизь "убивает" сперматозоиды, говорят о шеечном факторе бесплодия. Несовместимость партнеров может сочетаться с любой формой бесплодия, поэтому проба на совместимость должна являться одной из первых и обязательных процедур при обследовании всех бесплодных супружеских пар.
ПРОБА КУРЦРОКА-МИЛЛЕРА.
Слизь, взятую из шеечного канала, помещают под микроскоп вместе со спер-мой мужа. В норме через 20-30 минут сперматозоиды проникают в каплю слизи и продолжают свое движение. Если же проникновения не происходит, то можно ска-зать, что причина несовместимости обнаружена. Обычно делается в день овуляции.
ЕЩЕ ОБ АСАТ
Исследование антиспермальных антител
Исследования последних лет показали, что у большей части женщин с так называемым иммунным бесплодием в цервикальном секрете выявляются антитела, направленные против сперматозоидов. Подозрением на наличие aнтиспермального иммунитета, как вероятной причины бесплодия, служит отрицательный посткоитальный тест. Существует мнение, что чем больше у женщины половых партнеров, тем более иммунологически гетерогенным материалом «иммунизируется» женщина, и тем выше риск появления антиспермальных антител. Высказывается точка зрения о неблагоприятном влиянии половых инфекций, увеличивающих чувствительность иммунной системы женщины к «иммунизации» сперматозоидами за счет того, что микрофлора нарушает иммуносупрессорные свойства спермы и выступает в качестве своеобразного адьюванта. Тем не менее, основной причиной появления у женщины антиспермальных антител, следует считать дефекты в иммунной системе. Антиспермальный иммунитет чаще бывает у женщин с определенными НLА-DQ и НLА-DR типами, поэтому правомочно утверждение, что антиспермальный иммунитет является генетически обусловленным. Лечение женского бесплодия, связанного с присутствием в цервикальном секрете антиспермальных антител, заключается в проведении искусственного оплодотворения.
Антиспермальные антитела могут стать причиной и мужского бесплодия. Антитела, содержащиеся в сперме, взаимодействуют со сперматозоидами, вследствие чего последние теряют способность к оплодотворению. Наиболее частой причиной образования антиспермальных антител в мужском организме являются заболевания, вызывающие нарушение структуры яичка и целостности гематотестикулярного барьера. К таким заболеваниям относятся травма яичка, крипторхизм, варикоцеле (расширение вен семенного канатика), непроходимость семявыносящих путей, орхиты и орхоэпидимиты различного генеза, хроническая инфекция мочеполовой системы и заболевания, передаваемые половым путем. Рядом авторов указывается на связь между наличием антиспермальных антител и хронической уреаплазменной инфекцией. Лечение мужского бесплодия, связанного с наличием антиспермальных антител, представляет собой довольно сложную задачу. В настоящее время имеются сведения о хороших результатах комплексного применения плазмофереза с одновременным временным угнетением сперматогенеза андрогенными препаратами (ребаунд-эффект). Реальный эффект при данной форме бесплодия имеет ЭКО.
Материалом для анализа на антиспермальные антитела служит цервикальный секрет или сперма. Цервикальный секрет получают с помощью специальных зондовершиков (как в случае анализов на ПЦР). Далее материал с зонда смывают в специальном контейнере, содержащем консервирующий раствор. Сперму собирают путем мастурбации в стеклянные флаконы. Контейнеры с цервикальным секретом и флаконы со спермой должны быть доставлены в лабораторию в течение часа с момента забора материала.
(http://freewww.elcat.kg/aab/asat.htm)
Методы диагностики
К методам диагностики иммунологических форм бесплодия, связанных с выработкой АСАТ являются:
1. Посткоитальный тест, или тест взаимодействия сперматозоидов со слизью шейки матки. Он проводится в двух вариантах:
1. Тест in vivo (проба Шуварского-Симса-Хюнера). Пациентка приезжает на исследование после полового акта в дни, предшествующие овуляции. Исследуется содержимое влагалища и шейки матки. Хотя допустимым сроком между половым актом и исследованием являются 24 ч, мы рекомендуем проведение этой пробы через 3-12 часов после полового акта. Отрицательным («плохим») тест является тогда, когда подвижность сперматозоидов в половых путях женщины часто снижается.
2. Тест in vitro (проба Курцрока-Миллера). Супруги приезжают на исследование в дни, предшествующие овуляции. Муж сдает сперму, а у жены берется капелька слизи шейки матки. Оценивается взаимодействие сперматозоидов и слизи шейки матки под микроскопом. Отрицательным («плохим») результатом теста является снижение поступательного движения сперматозоидов в слизи шейки матки.
Следует помнить, что самой частой причиной отрицательного посткоитального теста является наличие АСАТ в сперме (т. е. проблема связана с мужем), а не в шейке матки. Однако очень часто наблюдается сочетание роли как мужских, так и женских факторов. Посткоитальный тест является одним из самых «капризных» тестов в обследовании бесплодия. Достаточно велик процент ложных результатов этого исследования. Поэтому посткоитальный тест необходимо дополнять проведением специальных исследований на АСАТ.
2. MAR-тест. Тест, который определяет процент сперматозоидов, связанных с антителами классов IgG и IgA (прямой MAR-тест) и титр антиспермальных антител в биологических жидкостях (спермоплазма, слизь шейки матки, плазма крови) (непрямой MAR-тест). Тест является международно признанным стандартом диагностики АСАТ. Тест обладает высокой специфичностью, но не всегда высокой чувствительностью.
3. Immunobead-тест. Является аналогом MAR-теста. Спектры антител определяемых тестами MAR и immunobead не всегда совпадают, что объясняет часто наблюдаемое расхождение между результатами тестов у одного и того же пациента.
4. Тест латекс-агглютинации является более новым и менее исследованным тестом на АСАТ. Выпускается немецкой фирмой «Bioserv Diagnostics». В разработке теста принимали известные германские иммунологи. Преимуществом теста является то, что он является прямым методом определения АСАТ в биологических жидкостях (сперме, шейке матки, плазме крови). Тест обладает очень большой чувствительностью. Спектр антител, выявляемых данным методом не всегда совпадает со спектром антител, определяемых тестами MAR и immunobead, поэтому все три теста являются взаимодополняющими.
Тактика лечения супружеской пары вырабатывается с учетом всего комплекса данных обследования.
5. Иммуноферментный метод (ELISA). Метод, обычно используемый для определения АСАТ в плазме крови. Является дополнительным методом диагностики АСАТ. Высокие титры АСАТ, определяемых методом ELISA в крови у женщин не всегда связаны с ухудшением прогноза наступления беременности
Адрес сообщения: https://eva.ru/topic/49/1245105.htm?messageId=35240687
ОтветитьРаспечатать сообщениеРаспечатать все сообщение топика
Антиспермальные антитела у женщин
Половые органы женщины содержат большое количество иммунокомпетентных клеток. Естественное попадание спермы в половые пути женщины может вызвать иммунный ответ.Однако иммунологические процессы, происходящие в женском организме после попадания спермы, недостаточно изучены. Образованию антител в женском организме препятствуют различные механизмы, снижающие иммунный ответ. В период овуляции изменяется баланс Т-лимфоцитов: уровень Т-хелперов снижается, а Т-супрессоров повышается, а так же уменьшается концентрация иммуноглобулинов и С3 компонента системы комплемента. Важную роль в снижении иммунного ответа на сперматозоиды играют мужские механизмы защиты: мимикрия — сорбция и десоробция поверхностных антигенов при смене сред и иммуносупрессивный фактор спермоплазмы. Кроме того, предполагается, что в маточные трубы попадает только небольшое число генетически отобранных сперматозоидов, иммунологически отличающихся от большинства, остальные же погибают, блокируя местный иммунитет.
Нарушение фертильности сопровождается нарушением защитных механизмов и появлением антиспермальных антител. Выработку антиспермальных антител в женском организме стимулирует дополнительное воздействие других изоантигенов, получающих доступ в половые пути женщины, так иммунный ответ на антигены сперматозоидов может повышаться при воспалительных заболеваниях влагалища. Изоиммунный ответ на сперматозоиды может реализовываться через антитела или клеточно-опосредованные механизмы, каждый из которых оказывает чаще всего местный эффект
Шейка матки является наиболее благоприятным и важным местом проявления местного иммунитета.
Антиспермальные антитела в сперме
Часто антиспермальные антитела обнаруживаются только в цервикальной жидкости и не определяются в сыворотке крови. Однако необходимо помнить, что гиперчувствительность замедленного типа к сперме и спермиммобилизирующие антитела могут встречаться и у здоровых женщин, имеющих регулярные половые сношения.
Предполагается, что антиспермальные антитела могут нарушать функциональную целостность мембраны сперматозоидов. У мужчин с антиспермальными антителами часто наблюдается снижение показателей теста гипоосмотического набухания сперматозоидов, который сочетается со снижением оплодотворяющей способности эякулята. Сниженный тест гипоосмотического набухания сперматозоидов выявляется как у мужчин с нормальными, так и субнормальными показателями спермограммы. Антиспермальные антитела могут оказывать повреждающее действие на функцию предстательной железы, в частности на простасомы, органеллы, секретируемые ацинарными клетками предстательной железы. Антиспермальные антитела классов IgG и IgА цервикальной слизи и других жидкостей женского репродуктивного тракта препятствуют продвижению сперматозоидов и их пенетрации через цервикальную слизь, блокируют рецепторные участки на головке сперматозоида, ответственные за связывание с блестящей оболочкой яйцеклетки
Кроме того, антиспермальные антитела нарушают процесс капацитации сперматозоидов, воздействуют на акросомальную реакцию, блокируя экзоцитоз кортикальных гранул.
Методы определения антиспермальных антител:
В настоящее время существует множество методик для определения антиспермальных антител. Наиболее простым и информативным является смешанный антиглобулиновый тест (MAR-test), рекомендованный ВОЗ для рутинного скрининга образцов семенной жидкости. Его преимуществами являются простота определения, возможность выявления антиспермальных антител на подвижных сперматозоидах. Тест выполняется на предметном стекле, на которое наносят одну каплю свежей спермы, одну каплю латексных частичек, покрытых IgА, затем одну каплю антисыворотки к человеческому IgG, перемешивают, смесь накрывают покровным стеклом и просматривают под микроскопом с увеличением 400х или 600х. Если сперматозоиды не покрыты антителами, то они свободно плавают между частицами, если же сперматозоиды покрыты антителами, то они, перемещаясь, притягивают к себе частицы латекса и склеиваются с ними. Высчитывают % сперматозоидов, склеенных с латексными частицами, покрытыми IgG (это вполне исчерпывающее исследование, т. к. установлено, что IgА практически всегда появляются вместе с IgG).
Альтернативой этому тесту может служить определение антиспермальных антител методом латексной агглютинации. Этот тест не применим для выявления количества подвижных сперматозоидов, покрытых антиспермальными антителами, зато он информативен при низких показателях подвижности сперматозоидов, а также для выявления антиспермальных антител в цервикальной слизи. Образцы для этого теста можно замораживать. Семенную жидкость или цервикальную слизь разводят буфером, центрифугируют, из надосадочной жидкости готовят разведения 1:100, 1:200 и т.д. На специальный планшет добавляют соответственные разведения образца и латексные частицы, затем оценивают появление агглютинации. Если она появляется в разведении 1:100, тест считается положительным.
Для определения антиспермальных антител в сыворотке крови используются наборы на основе метода непрямого твердофазного иммуноферментного анализа. Образцы разводят и помещают в микропланшет, ячейки которого покрыты смесью белков, способных взаимодействовать с антителами, антиспермальные антитела, находящиеся в образце связываются с этими белками и после определенной последовательности действий измеряется оптическая плотность содержимого ячеек, которая пропорциональна концентрации антиспермальных антител. Нормальные значения: 0-60 Ед/мл; Промежуточные значения: 61-100 Ед/мл; Повышенные: более 100 Ед/мл.
Существуют и другие, менее распространенные методы определения антиспермальных антител: проточная цитометрия (определение антиспермальных антител и их концентрации на мембране сперматозоидов), радиоиммунный, иммунофлуоресценция и др.